Durante el desarrollo de esta tesis nos propusimos identificar las PTPs presentes en los espermatozoides de mamíferos y estudiar su regulación en estas células intentando correlacionar el patrón de activación con la motilidad, la capacitación y la reacción acrosómica. Además, estudiamos el estrés oxidativo y su relación con el estado de activación de fosfatasas, fosforilación en tirosina y supervivencia de los espermatozoides, y valoramos el efecto de antioxidantes y agentes reductores en estos parámetros.Para desarrollar este estudio hemos utilizado técnicas de Western blotting en lisados celulares totales y en fracciones subcelulares de espermatozoides de mamíferos, además de microscopía confocal con anticuerpos específicos. Se han ensayado 35 anticuerpos comerciales diferentes en lisados de espermatozoides, que cubren una amplia variedad de proteínas con actividad fosfatasa. Además hemos realizado ensayos de actividad basados en la hidrólisis del sustrato específico DIFMUP.Las fosfatasas inequívocamente identificadas han sido la tirosina fosfatasa receptor PTPRB, la tirosina fosfatasa citosólica PTPN11, y las fosfatasas de especificidad dual DUSP3 y DUSP4, indicando que en los espermatozoides de mamíferos están presentes varias PTPs, aunque nuestros resultados también indican que la presencia de estos enzimas es variable en función de la especie. Además, los estudios de actividad y funcionales indican que estos enzimas juegan un papel muy destacado en la regulación de la motilidad y que la actividad tirosina fosfatasa está comprometida durante el almacenamiento de los espermatozoides congelados o refrigerados y por lo tanto, podría ser un punto de control esencial para mantener las características adecuadas en esas células. Por otra parte, el estudio específico de la PTPN11 indica que esta enzima parece desempeñar un papel muy importante en la regulación de la capacitación y su estado de fosforilación podría ser un indicador del estado de desarrollo de este proceso. Finalmente, el mecanismo de activación de la PTPN11 en los espermatozoides depende de la fosforilación en residuos de tirosina específicos que está regulada por la vía del APMc/PKA y parece requerir el concurso de proteínas adaptadoras.
