La creciente importancia de las enfermedades transmitidas por insectos exige una mejor comprensión de estos vectores de agentes infecciosos, especialmente en regiones donde, como en Extremadura (suroeste de España), existen grandes lagunas en el conocimiento de estos artrópodos. Esta fue la principal motivación detrás de este estudio, que se implementó para aportar nuevos conocimientos sobre la diversidad, distribución y estacionalidad de la familia Culicidae (Diptera: Culicidae) y de la subfamilia Phlebotominae (Diptera: Psychodidae). Además, se evaluaron los factores ambientales asociados a su presencia en Extremadura. Igualmente, gracias al uso de enfoques moleculares, se analizó la presencia de Dirofilaria spp. y Leishmania spp., transmitidos respectivamente por estos dos grupos de dípteros.El estudio aquí presentado, se basó en un muestreo entomológico realizado durante los años 2012 y 2013, usando trampas de luz ultravioleta (CDC, Modelo 512; John W. Hock Company, Gainesville, FL, USA) sin atrayentes. Estas trampas se colocaron en 21 puntos de muestreo pertenecientes a 13 comarcas de Extremadura y los ejemplares capturados fueron identificados morfológicamente. Todas las hembras fueron utilizadas para la detección molecular de Dirofilaria spp. en los culícidos, usando marcadores mitocondriales ITS-2 y COI; así como de Leishmania spp. mediante marcadores del ADNk, ITS-1 y cyt-b en flebotomos.En cuanto a la familia Culicidae, se analizaron un total de 1495 especímenes adultos distribuidos en 16 especies, de las cuales Culex pipiens s.l., Culex theileri y Culiseta longioreolata fueron las más abundantes. Además, se detectaron 5 nuevos registros para esta región: Anopheles maculipennis s.s. (por métodos moleculares), Orthopodomyia pulcripalpis, Aedes (Ochlerotatus) punctor, Culex europaeus y Culex modestus. Por último, entre los mosquitos recogidos, 15 ejemplares se clasificaron como Culex univittatus, que, junto con Culex perexiguus, son considerados vectores competentes para la transmisión de virus como el virus del Nilo Occidental (VNO), y no siempre tienen una clara diferenciación morfológica, siendo la presencia de una o ambas especies objeto de controversia tanto en Europa, como en la península ibérica. Parte de este trabajo se centró en el estudio y comparación de ejemplares de Cx. univittatus recogidos en Portugal y España, con respecto a otros ejemplares capturados en la región de Highveld de la República de Sudáfrica, donde está certificado que es la única espécie presente de este subgrupo. Esta comparación fue basada en el uso de parámetros morfológicos y análisis de los genitales, así como del análisis de secuencias nucleotídicas (usando como marcador mitocondrial la secuencia parcial de la proteína COI).Los resultados mostraron que los especímenes ibéricos y sudafricanos son morfológicamente similares, a excepción de la longitud del brazo ventral del falosoma, que fue superior en las muestras ibéricas, seguramente debido al aislamiento geográfico de ambas poblaciones. El análisis filogenético agrupó los ejemplares ibéricos más cerca de mosquitos Cx. univittatus de África del Sur que con ejemplares Cx. perexiguus procedentes de Turquía y Pakistán y presentes en el GenBank. Por tanto, el presente estudio demuestra que Cx. univittatus está presente en la península ibérica.Por otra parte, Culex pipiens (Linnaeus, 1758) tiene una distribución mundial y es considerado como el vector principal para el VNO, virus Usutu (USUV) y uno de los principales vectores del virus de la fiebre del Valle del Rift (VFVR). Ya que tanto el VNO como el USUV han sido previamente detectados en España (en las provincias de Cataluña y Huelva, respectivamente), un mejor conocimiento de la composición y / o distribución de las formas de Cx. pipiens s.s. presentes en Extremadura, puede aportar importantes conocimientos a los esfuerzos de vigilancia, especialmente cuando se centran en las regiones intersectadas por las rutas migratorias de aves migratorias, y donde un gran número de ganado está presente. También se confirmó que los factores ambientales que más condicionaron mayores densidades de estos mosquitos fueron las altas temperaturas, la proximidad a los biotopos asociados a las zonas urbanas y las zonas rurales cercanas a las granjas ovinas.En cuanto a la caracterización genética de las formas biológicas de Cx. pipiens s.s., el análisis molecular del locus CQ11FL en 467 especímenes mostró que el 66 % pertenecía a la forma pipiens, el 8,4 % a la forma molestus, mientras que un 25,7 % correspondía a híbridos. Aunque todas estas formas coexistieron simpátricamente a lo largo del año (como se ha demostrado anteriormente en otras regiones de Europa) en los mismos biotopos (urbano, periurbano y rural), la forma pipiens fue siempre la más abundante. Este estudio denuncia la coexistencia de estas dos formas al suroeste de España, lo que confirma un marco común en toda Europa. Creemos que estos resultados sobre la ecología y la distribución de las diferentes formas de Cx. pipens son relevantes a la luz de la posible implementación de programas integrados de salud, así como para una correcta evaluación del riesgo de transmisión de los agentes infecciosos asociados (incluidos los arbovirus).También se realizó un cribado genético para la presencia de ADN de Dirofilaria spp. en 11 especies diferentes de mosquitos, totalizando 881 ejemplares hembras. El ADN de Dirofilaria immitis se detectó en un solo ejemplar de Cx. pipiens s.s. tanto en la cabeza-tórax, así como en las fracciones del abdomen. Además, ADN de Filariidae, posiblemente de origen aviar, se detectó adicionalmente en 8 especímenes de Cx. pipiens s.s., pero los análisis genéticos realizados no pudieron diferenciar inequívocamente las secuencias de ADN obtenidas. La detección de ADN de D. immitis en una hembra de Cx. pipiens forma pipiens, no sólo en el abdomen, sino, por primera vez en España, también en cabeza y tórax, incluyendo también la detección de ADN de Filariidae en otros ejemplares de la misma especie, sugiere el desarrollo larvario de estos parásitos en los mosquitos analizados y señala su posible papel como vector competente de los mismos. Una vez más, el análisis del locus CQ11FL en todos estos especímenes confirmó su distribución en formas pipiens, molestus y híbridas. El locus ADNr ITS-2 de estos mosquitos se caracterizó y reveló la presencia de los haplotipos H1 y H2 de Cx. pipiens s.s.En el caso de la subfamilia Phlebotominae, el análisis de un total de 1083 especímenes de flebotomíneos adultos permitió su segregación en 5 especies a saber: Phlebotomus perniciosus (60,76 %), Sergentomyia minuta (29,92 %), P. ariasi (7,11 %), P. papatasi (1,48 %) y P. sergenti (0,74 %), las tres últimas especies nunca habían sido descritas en la provincia de Badajoz. El análisis de los factores de riesgo que influyen en las densidades de P. perniciosus y S. minuta indicaron que la temperatura y la altitud no son los únicos factores que regulan su distribución, sino también el biotopo donde se desarrollan. Se encontraron unas mayores densidades de P. perniciosus en entornos agrícolas con proximidad a granjas, en comparación con las zonas urbanas, y en áreas silvestres y/o cercanas a granjas para S. minuta. La detección de ADN de Leishmania spp. se llevó a cabo en 549 especímenes. El uso de PCR junto con el análisis filogenético de los amplicones obtenidos, reveló la presencia de L. infantum en P. perniciosus (N=1), mientras que las secuencias filogenéticamente relacionadas con Leishmania tarentolae se detectaron por primera vez en España en hembras de S. minuta (N=2). A pesar de pertenecer al grupo de Sauroleishmania (que infecta a los reptiles), debe realizarse el análisis de su prevalencia, distribución y potenciales hospedadores susceptibles.Por último, el análisis de las preferencias hemáticas de los flebotomos mediante la detección de ADN de vertebrados en el abdomen de una fracción de los especímenes analizados, apuntaba a una amplia preferencia de hospedadores vertebrados que incluía cerdos, ovejas, conejos, caballos, burros, pavos y humanos. La presencia simultánea en Extremadura de P. perniciosus y P. ariasi, ambos confirmados como vectores de L. infantum, con comportamientos de alimentación oportunistas, y la detección de L. infantum en uno de los posteriores (P. perniciosus), apunta a la posibilidad de transmisión de este parásito en esta región de España. Creemos que estos resultados contribuyen al conocimiento de la epidemiología de la leishmaniosis en la península ibérica y sugieren una vez más, la necesidad de una vigilancia entomológica y parasitológica continua en la región.