Introducción: El diagnóstico de la leishmaniosis canina (L. Can) por Leishmania infamtum, es complejo por el largo periodo de incubación, la existencia de portadores inaparentes capaces de trasmitir el parásito a los vectores y por la necesidad de utilizar diferentes técnicas diagnósticas, inmunológicas y moleculares, para la detección precoz. Objetivos: Los objetivos generales planteados fueron: a) Validar las técnicas aplicadas al diagnóstico de la LCan, ELISA SLA IgG2, IFI y Real Time PCR (qPCR); b) desarrollar un sistema de diagnóstico múltiple para la detección y seguimiento de perros infectados por L. infantum.Material y métodos: Para la validación de ELISA SLA IgG2 e IFI, se utilizaron muestras de suero sanguíneo procedentes de 116, y 96 perros respectivamente y para qPCR, 44 muestras de médula ósea y ganglio linfático. Se estudiaron los atributos linealidad, exactitud, especificidad, sensibilidad, precisión, límite de detección y cuantificación, robustez y estabilidad.Para la consecución del segundo objetivo, se ha desarrollado un sistema de diagnóstico múltiple utilizando muestras no invasivas, pelo, hisopados (cerumen-mucosas-piel) y sangre seca adherida a papel Whatman, cuyo dosier se incluye en esta Tesis Doctoral y cuyos resultados de aplicación, se discuten mediante dos artículos publicados. Resultados y conclusiones: Se evidencia que nuestros métodos diagnósticos estandarizados, ELISA, IFI y qPCR, son altamente fiables, sensibles y específicos. Estas técnicas han servido de referencia para el desarrollado MultiLeish 5D, un sistema de diagnóstico múltiple para la detección y seguimiento de la LCan, que permite a los profesionales veterinarios el diagnóstico en las diferentes fases y estados de la patocronia, primoinfectados, latentes evolutivos y patentes.